Что означает гиалуроновая кислота. Научное обозрение

Гиалуроновая кислота (ГК), также известная как (соль кислоты) или гиалуронан (объединяющее обозначение для кислоты и ее соли), представляет собой анионный натуральный полисахарид (несульфированный простейший гликозаминогликан), который является важным компонентом нервной, эпителиальной, соединительной тканей и основным ингредиентом внеклеточного матрикса.

Гиалуроновая кислота также входит в состав многих, присущих живым организмам биологических жидкостей (синовиальная жидкость, слюна и пр.). Данное вещество может продуцироваться некоторыми бактериями (например, стрептококками ) и выделяться из органов животных (гребень петуха, стекловидное тело и хрящевая ткань рогатого скота).

В человеческом теле массой около 70-ти килограмм в среднем содержится примерно 15 граммов этой эндогенной кислоты, третья часть которой ежесуточно подвергается преобразованию (расщепляется или синтезируется).

Структура и строение

Структурная схема ГК характерна для линейного полисахарида, состоящего из чередующихся остаточных частей N-aцетил-D-гликозамина и D-глюкуроновой кислоты , последовательно соединенных гликозидными связями β-1,3 и β-1,4.

Одна молекула данной кислоты может включать до 25 тысяч подобных дисахаридных звеньев. ГК природного происхождения обладает молекулярной массой варьирующей в пределах 5000-20000000 Да. У человека среднее значение молекулярной массы находящегося в синовиальной жидкости полимера равняется 3140000 Да.

Молекула кислоты энергетически стабильна, в том числе вследствие стереохимии дисахаридов входящих в ее состав. В пиранозном кольце объемные заместители расположены в стерически выгодных позициях, тогда как меньшие по объему атомы водорода размещены в менее выигрышных аксиальных положениях.

Образование: Окончил Винницкий национальный медицинский университет им. Н.И.Пирогова, фармацевтический факультет, высшее фармацевтическое образование – специальность «Провизор».

Опыт работы: Работа в аптечных сетях «Конекс» и «Биос-Медиа» по специальности «Фармацевт». Работа по специальности «Провизор» в аптечной сети «Авиценна» города Винница.

Комментарии

Я тоже кстати гиалуронку в таблетка принимаю. Кстати, у Эвалара хорошая, да, но там эффект накопительный, надо 2 месяца пить и не забывать

Было много проблем с кожей:шелушилась, трескалась, стали появляться морщины. Из-за этого решила попробовать гиалуроновую кислоту в таблетках, да так и осталась ее пить. Уже 6 курсов прошла, с кожей стало гораздо лучше, даже холода теперь не страшны.

Спасибо за хорошую статью. Сама принимаю гиалуронку уже давно. Пробовала и крем, и инъекции, но остановилась на таблетках. Думаю, что это все-таки самое практичное, что создали.

Молекулярная формула: (C14H21NO11)n
Растворимость в воде: растворим (натриевая соль)
LD50:
2400 мг / кг (мыши, пероральное введение, натриевая соль)
4000 мг / кг (мыши, подкожное введение, натриевая соль)
1500 мг / кг (мыши, внутрибрюшное введение, натриевая соль)
Связанные соединения: D-глюкуроновая кислота и DN-ацетилглюкозамина (мономеры)
Гиалуроновая кислота (гиалуронат или ГК) является анионным, не сульфатированным гликозаминогликаном, широко распространяется в соединительной, эпителиальной и нервной ткани. Является уникальным среди гликозаминогликанов соединением, поскольку представляет собой не сульфатированную форму, формируется в плазматической мембране, а не в Гольджи, и может достигать очень больших размеров, с молекулярной массой, часто достигающей миллионов. Являясь одним из основных компонентов внеклеточного матрикса, гиалуроновая кислота в значительной степени способствует пролиферации и миграции клеток, а также может быть вовлечена в развитие некоторых злокачественных опухолей. В среднем, у человека с весом 70 кг (154 фунтов) содержится в организме около 15 граммов гиалуроновой кислоты, одна треть из которой восполняется (деградирует и синтезируется) каждый день. Гиалуроновая кислота является также составной частью стрептококковой группы А внеклеточной капсулы А, и, как полагают, играет важную роль в вирулентности (степени патогенности микроорганизма).

Медицинское применение

Гиалуроновая кислота иногда используется для лечения остеоартрита коленного сустава в виде препарата для инъекций в сустав. Эффективность гиалуроновой кислоты при таком применении, однако, не была доказана, и такое использование может быть связано потенциально с серьезными побочными эффектами. Такие симптомы, как сухая, чешуйчатая кожиа (ксероз), вызванные, например, атопическим дерматитом (экземой), могут лечиться с использованием лосьона для кожи, содержащего гиалуронат натрия в качестве активного ингредиента. При некоторых видах рака, уровни гиалуронана коррелируют со злокачественностью и плохим прогнозом. Гиалуроновая кислота, таким образом, часто используется в качестве опухолевого маркера для определения рака предстательной железы и рака молочной железы. Вещество также может использоваться для мониторинга прогрессирования заболевания. Гиалуроновая кислота также может быть использована в послеоперационном периоде для заживления тканей, особенно после хирургии катаракты. Современные модели заживления ран предлагают использовать более крупные полимеры гиалуроновой кислоты на ранних стадиях заживления, что позволит физически освободить место для белых кровяных клеток, опосредующих иммунный ответ. Гиалуроновая кислота также используется в синтезе биологических каркасов для заживления ран. Эти каркасы, как правило, содержат белки, такие как фибронектин, прикрепленные к гиалуроновой кислоте, чтобы облегчить миграцию клеток в рану. Это особенно важно для людей, страдающих диабетом и хроническими ранами. В 2007 году EMA продлила свое одобрение на препарат Hylan GF-20 для лечения боли при остеоартрите лодыжки и предплечья.

Функции

До конца 1970-х годов, гиалуроновую кислоту считали «вязкой» молекулой, распространенным углеводным полимером и частью внеклеточного матрикса. Гиалуроновая кислота является основным компонентом синовиальной жидкости, которое повышает вязкость жидкости. Наряду с лубрицином, гиалуроновая кислота является одним из основных смазочных компонентов жидкости. Гиалуроновая кислота является важным компонентом суставного хряща, где она служит покрытием вокруг каждой ячейки (хондроцитов). Когда аггрекановые мономеры связываются с гиалуроновой кислотой в присутствии белка, образуются большие, высоко отрицательно заряженные агрегаты. Эти агрегаты впитывают воду и отвечают за упругость хряща (его устойчивость к компрессии). Молекулярная масса (размер) гиалуроновой кислоты в хряще уменьшается с возрастом, но при этом ее количество увеличивается. Гиалуроновая кислота является также основным компонентом кожи и участвует в процессах восстановления тканей. Когда кожа подвергается чрезмерному воздействию ультрафиолетовых лучей спектра B, она становится воспаленной (образуются солнечные ожоги), и клетки в дерме прекращают производство большого количества гиалуроновой кислоты, и увеличивают скорость ее деградации. После ультрафиолетового облучения, продукты деградации гиалуроновой кислоты накапливаются в коже. Присутствуя в изобилии во внеклеточной матрице, гиалуроновая кислота также воздействует на гидродинамику ткани, движение и пролиферацию клеток, а также участвует в ряде взаимодействий рецепторов клеточной поверхности, в том числе основных рецепторов, CD44 и RHAMM. Стимуляция CD44 широко применяется в качестве маркера активации клеток в лимфоцитах. Воздействие Гиалуронана на рост опухоли может быть связано с его взаимодействием с CD44. Рецептор CD44 участвует во взаимодействиях клеточной адгезии, опосредованной с опухолевыми клетками. Несмотря на то, что гиалуроновая кислота связывается с рецептором CD44, есть свидетельства того, что продукты деградации ГК преобразуют их импульс воспаления через толл-подобный рецептор 2 (TLR2), TLR4 или через оба рецептора TLR2 и TLR4 в макрофаги и дендритные клетки. Толл-подобный рецептор и гиалуроновая кислота играют важную роль в формировании врожденного иммунитета. Высокие концентрации гиалуроновой кислоты в мозге крысят, и пониженные концентрации в мозге взрослых крыс, наводят на мысль, что ГК играет важную роль в развитии мозга.

Структура

Свойства ГК впервые были установлены в 1930 году в лаборатории Карла Мейера. Гиалуроновая кислота представляет собой полимер дисахаридов, которые входят в состав D-глюкуроновой кислоты и DN-ацетилглюкозамина, связанные через чередующиеся β-1,4 и β-1,3 гликозидные связи. Гиалуроновая кислота может состоять из 25000 повторяющихся единиц дисахарида в длину. Полимеры ГК могут варьироваться в размере от 5000 до 20000 тысяч Да в естественных условиях. Средняя молекулярная масса гиалуроновой кислоты в синовиальной жидкости человека составляет 3-4 млн Да, а молекулярная масса гиалуроновой кислоты, выделенной из пуповины человека, составляет 3140000 Да. Гиалуроновая кислота является энергетически стабильным веществом, отчасти из-за стереохимии составляющих ее дисахаридов. Громоздкие группы в каждой молекуле сахара находятся на пространственно привилегированных позициях, в то время как меньшие атомы водорода занимают менее благоприятные осевые положения.

Биологический синтез

Гиалуроновая кислота синтезируется классом интегральных мембранных белков, называемых гиалуроновыми синтазами, три типа которых присутствуют у позвоночных: Has1, HAS2, и HAS3. Эти ферменты постепенно удлиняют гуалуронан, попеременно добавляя к нему N – ацетилглюкозамин и глюкуроновую кислоту, в то время пока он выталкивается через ABC-транспортер и через клеточную мембрану во внеклеточное пространство. Синтез гиалуроновой кислоты ингибируется 4-метилумбеллифероном (гимекромон, гепарвит), производной 7-гидрокси-4-метилкумарина. Это селективное ингибирование (без ингибирования других гликозаминогликанов) может оказаться полезным в предотвращении метастазирования злокачественных опухолевых клеток. Недавно была создана генетически модифицированная (ГМО) сенная палочка для получения ГК, в виде запатентованного продукта, пригодного для употребления человеком.

Клеточные рецепторы гиалуроновой кислоты

На настоящий момент, клеточные рецепторы ГК делятся на три основных группы: CD44, рецептор для ГК-опосредованной моторики (RHAMM) и молекула межклеточной адгезии -1. CD44 и ICAM-1 уже были известны как молекулы клеточной адгезии с другими признанными лигандами, до того как было открыто их связывание с ГК. Рецептор CD44 широко распространен по всему телу. Формальная демонстрация связывания ГК-CD44 была предложена Аруффо и соавторами в 1990 году. На сегодняшний день CD44 признан в качестве основного клеточного поверхностного рецептора ГК. CD44 опосредует взаимодействие клеток с ГК и связывание двух функций в качестве важной части в различных физиологических функциях, таких как агрегация, миграция, пролиферация и активация клеток; адгезия клетка-клетка и клетка-субстрат; эндоцитоз ГК, который приводит к катаболизму ГК в макрофагах и т.д. Две значимые роли CD44 в кожных процессах были выдвинуты Кая и другими. Первая заключается в регулировании пролиферации кератиноцитов в ответ на внеклеточные стимулы, а вторая – в поддержании местного гомеостаза ГК. ICAM-1 (фактор межклеточной адгезии 1) известен, главным образом, как метаболический рецептор клеточной поверхности ГК, этот белок может отвечать в основном за клиренс ГК из лимфы и плазмы крови, на его долю приходится, возможно, большая часть всего метаболизма ГК в организме. Таким образом, связь лиганда данного рецептора вызывает высоко скоординированный каскад событий, который включает в себя формирование эндоцитозного пузырька, его соединение с первичными лизосомами, ферментативное расщепления до моносахаридов, активный трансмембранный перенос этих сахаров в клеточном соке, фосфорилирование аспарагиновой кислоты и ферментативное ацетилирование. ICAM-1 может также служить в качестве молекулы клеточной адгезии, связь ГК с ICAM-1 может способствовать контролю ICAM-1-опосредованной воспалительной активации.

Расщепление

Гиалуроновая кислота расщепляется семейством ферментов, называемым гиалуронидазы. В организме человека присутствует, по крайней мере, семь типов ферментов гиалуронидазы, некоторые из которых являются опухолевыми супрессорами. Продукты распада гиалуроновой кислоты, олигосахариды и ГК с очень с низким молекулярным весом, проявляют проангиогенные свойства. В дополнение к этому, недавние исследования показали, что фрагменты гиалуроновой кислоты могут вызывать воспалительные реакции макрофагов и дендритных клеток на месте поврежденной ткани и пересажанной кожи.

Действие

Заживление ран

Кожа обеспечивает механический барьер для внешней среды и действует для предотвращения проникновения инфекционных агентов. Поврежденная ткань подвержена инфицированию; поэтому, быстрое и эффективное лечение имеет решающее значение для реконструкции барьерной функции. Заживление ран на коже представляет собой сложный процесс, и включает в себя множество взаимодействующих процессов, опосредованных гемостазом и выделением тромбоцитарных факторов. Следующими этапами являются: воспаление, образование грануляционной ткани, эпителизация и реконструкция. ГК, вероятно, играет многогранную роль в ходе этих клеточных и матричных процессов. ГК, предположительно, играет роль в заживлении ран кожи.

Воспаление

Многие биологические факторы, такие как факторы роста, цитокины, эйкозаноиды и т.д., генерируются в процессе воспаления. Эти факторы являются необходимыми на последующих стадиях заживления ран, поскольку отвечают за миграцию воспалительных клеток, фибробластов и эндотелиальных клеток в месте раны. В начале воспалительной фазы процесса заживления раны, поврежденная ткань насыщена ГК. Вероятно, это является отражением повышенного синтеза ГК. ГК действует как стимулятор на ранней стадии воспаления и имеет решающее значение в процессе заживления всей поврежденной ткани. Для совершенствования клеточной инфильтрации, велись наблюдения за ГК в мышиной модели воздушного мешка (доклинические исследования; в спинной области мышей создается полость при помощи подкожного введения стерильного воздуха) воспаления, индуцированного каррагинаном/IL-1. Кабаши и его коллеги показали дозозависимое увеличение производства провоспалительных цитокинов TNF -α и IL-8 с помощью маточных фибробластов человека в концентрации ГК от 10 мкг/мл до 1 мг/мл через опосредованный CD44- механизм. Клетки эндотелия, в ответ на воспалительные цитокины, такие как TNF-α, и бактериальные липополисахариды, также синтезируют ГК, что облегчает первичную адгезию цитокин-активированных лимфоцитов, экспрессирующих виды ГК-связи CD44 при условиях ламинарного и статического потока. Интересно отметить, что ГК имеет противоположные двойные функции в воспалительном процессе. Она не только может способствовать заживлению воспаления, как указано выше, но также может вызывать умеренную воспалительную реакцию, которая может способствовать стабилизации матрицы грануляционной ткани.

Гранулирование и организация матрицы грануляционной ткани

Грануляционная ткань является перфузируемой, волокнистой соединительной тканью, которая заменяет сгусток фибрина при заживлении ран. Она, как правило, растет от основания раны и способна заполнить рану практически любых размеров. ГК присутствует в изобилии в матрице грануляционной ткани. Все разнообразие функций клеток, которое необходимо для восстановления тканей, можно приписать к богатой ГК сети. Эти функции включают в себя содействие миграции клеток в предварительной матрице раны, клеточную пролиферацию и организацию матрицы грануляционной ткани. Инициирование воспаления имеет решающее значение для формирования грануляционной ткани, поэтому провоспалительная роль ГК, как описано выше, также вносит свой вклад в эту стадию заживления ран.

ГК и миграция клеток

Миграция клеток имеет важное значение для формирования грануляционной ткани. Ранняя стадия развития грануляционной ткани опосредована богатым ГК внеклеточным матриксом, который рассматривается в качестве благоприятной среды для миграции клеток в этой временной матрице раны. Роль ГК в миграции клеток можно объяснить ее физико-химическими свойствами, как указано выше, а также ее прямым взаимодействием с клетками. Для осуществления первого сценария, ГК предоставляет собой открытую водосодержащую матрицу, которая облегчает миграцию клеток, тогда как в последнем случае, направленная миграция и контроль двигательных механизмов клетки опосредованы через специфическое взаимодействие клеток между ГК и поверхностными клеточными рецепторами ГК. Как уже говорилось ранее, тремя главными поверхностными клеточными рецепторами ГК являются CD44, RHAMM, и ICAM-1. RHAMM больше связан с клеточной миграцией. Он образует связи с несколькими протеинкиназами, связанными с клеточной локомоцией, например, внеклеточной регулируемой протеинкиназой (ERK), p125fak и pp60c-Src. Во время эмбрионального развития, путь миграции, через который мигрируют клетки нервного гребня, богат ГК. ГК тесно связана с процессом миграции клеток в матрице грануляционной ткани, исследования показывают, что движение клеток может быть перекрыто, по крайней мере, частично, деградацией ГК или путем блокирования связывания ГК с рецептором. Обеспечивая динамическую силу в клетке, синтез ГК также связан с клеточной миграцией. Как правило, ГК синтезируется в плазматической мембране и выходит непосредственно во внеклеточную среду. Это может способствовать гидратации микросреды в местах синтеза, и имеет важное значение для миграции клеток путем содействия клеточному отщеплению.

Роль ГК при регулировании воспалительного ответа

Хотя воспаление является составной частью формирования грануляционной ткани, для нормального восстановления тканей, должно процесс воспаления следует сдержать. Гранулированная ткань подвержена воспалениям, имеет высокую скорость метаболизма, опосредованного деградацией матричных ферментов и реакционноспособных метаболитов кислорода, которые являются продуктами воспалительных клеток. Стабилизация матрицы грануляционной ткани может быть достигнута путем сдерживания воспаления. ГК функционирует как важный фактор в этом процессе замедления, что противоречит ее роли в воспалительной стимуляции, как описано выше. ГК может защитить от вредного воздействия свободных радикалов на клетки. В исследованиях Фоши Д. и коллег на крысиной модели, было показало, что ГК поглощает свободные радикалы, тем самым уменьшая ущерб, нанесенный грануляционной ткани. В дополнение к роли поглощения свободных радикалов, ГК может также функционировать в отрицательной обратной петле воспалительной активации через ее специфические биологические взаимодействия с биологическими компонентами воспаления. ФНО-α, важный цитокин, генерируемый при воспалении, стимулирует экспрессию TSG-6 (ФНО-стимулирующего гена 6) в фибробластах и воспалительных клетках. TSG-6, ГК-связывающий белок, также образует стабильный комплекс с сывороточным ингибитором протеиназы IαI (Inter-α-ингибитор), оказывая синергический эффект на плазмин-ингибирующую активность последнего. Плазмин вовлечен в активацию протеолитического каскада матриксных металлопротеиназ и других белков, ведущих к воспалительному повреждению ткани. Таким образом, действие TSG-6/IαI комплексов, которые могут быть дополнительно организованны посредством связывания с ГК во внеклеточном матриксе, могут служить в качестве мощной петли отрицательной обратной связи при умеренном воспалении и стабилизировать грануляционную ткань, по мере того как заживление будет прогрессировать. В мышиной модели воздушного мешка при воспалении, индуцированном каррагенаном/ИЛ-1 (интерлейкином-1β), где ГК проявляла противовоспалительные свойства, уменьшение воспаления могло быть достигнуто путем введения TSG-6. Результат при этом сопоставим с системной терапией дексаметазоном.

Реэпителизация

ГК играет важную роль в нормализации эпидермиса. ГК имеет важные функции в процессе реэпителизации, за счет нескольких своих свойств. Она служит в качестве неотъемлемой части внеклеточного матрикса базальных кератиноцитов, которые являются основными составляющими эпидермиса; ГК служит для «очищения» кожи от свободных радикалов и играет роль в пролиферации и миграции кератиноцитов. В нормальной коже, ГК в относительных высоких концентрациях содержится в базальном слое эпидермиса, где находятся пролиферирующие кератиноциты. CD44 соединяется с ГК в базальном слое эпидермиса, где он экспрессируется на плазме мембраны, сталкиваясь с богатыми ГК матричными мешочками. Основными функциями ГК в эпидермисе являются поддержание внеклеточного пространства и обеспечение открытой и гидратированной структуры для прохождения питательных веществ. Тамми П. и другие его коллеги обнаружили увеличение содержания ГК при наличии ретиноевой кислоты (витамина А). Предлагаемые эффекты ретиноевой кислоты в отношении фото-повреждения и старения кожи могут быть связаны, по крайней мере, частично, с увеличением содержание ГК в коже, порождая увеличение гидратации ткани. Было высказано предположение, что свойство ГК по удалению свободных радикалов способствует защите от солнечного излучения, поддерживает роль CD44 в качестве рецептора ГК в эпидермисе. Эпидермальная ГК также функционирует в качестве манипулятора в процессе пролиферации кератиноцитов, что очень важно для нормального функционирования эпидермиса, а также во время эпителизации при восстановлении тканей. В процессе заживления ран, ГК экспрессируется по краям раны, в матрице соединительной ткани. Кая и соавторы показали, что подавление экспрессии CD44 с помощью определенного трансгена, приводит в результате у животных к дефициту ГК и различным морфологическим изменениям базальных кератиноцитов и неправильному распространению кератиноцитов в ответ на митоген и факторы роста. Наблюдалось также снижение эластичности кожи, нарушение местной воспалительной реакции и нарушения репарации тканей. Их наблюдения поддерживают важную роль ГК и CD44 в физиологии кожи и восстановлении тканей.

Эмбриональное заживление ран и рубцов

Отсутствие волокнистых рубцов является основным признаком заживления ран у плода. Даже в течение более длительных периодов, содержание ГК в ранах плода выше, чем в ранах у взрослых, что позволяет предположить, что ГК, по крайней мере, частично, снижает отложение коллагена и поэтому приводит к снижению образования рубцов. Это предположение согласуется с исследованиями Веста и др., которые показали, что изъятие ГК у взрослых и у плода на поздних сроках беременности вызывает появление фиброзных рубцов.

Роль в метастазировании

Синтазы гиалуроновой кислоты (ГКС) играют роль во всех стадиях раковых метастазов. При производстве анти-адгезионной ГК, ГКС может позволить опухолевым клеткам освободиться от первичной опухолевой массы, и если ГК связывается с рецепторами, такими как CD44, активация ГТФазы может способствовать эпителиальным-мезенхимальным переходам (ЭМП) раковых клеток. Во время процессов интровазации или экстравазации, взаимодействие ГКС, производящих ГК рецепторы, такие как CD44 и RHAMM, провоцирует изменения в клетках, которые позволяют раковым клеткам проникать в кровеносную или лимфатическую системы. Во время передвижения в этих системах, ГК, производимая ГКС, защищает раковые клетки от механических повреждений. Наконец, в формировании метастатических поражений, ГКС производит ГК, чтобы позволить раковым клеткам взаимодействовать с родными клетками на вторичном узле, и производить опухоль. Гиалуронидазы (HAase или HYAL) также играют множество ролей в формировании раковых метастаз. Помогая разрушать внеклеточный матрикс, окружающий опухоль, гиалуронидазы помогают раковым клеткам уходить от первичной массы опухоли и играют важную роль в интровазии, позволяя осуществлять распад базальной лимфатической мембраны или кровеносного сосуда. Гиалуронидазы участвуют в создании метастатического поражения, способствуя экстравазации и очищая внеклеточный матрикс. Наконец, гиалуронидазы играют ключевую роль в процессе ангиогенеза. Фрагменты ГК стимулируют ангиогенез и гиалуронидазы, производящие эти фрагменты. Интересно, что гипоксия также увеличивает производство ГК и активность гиулоронидазов. Рецепторы гиалуроновой кислоты, CD44 и RHAMM, наиболее хорошо изучены с точки зрения их роли в раковом метастазировании. Повышенная экспрессия CD44 клинически положительно коррелирует с метастазами в ряде типов опухолей. CD44 влияет на адгезию опухолевых клеток друг к другу и к эндотелиальным клеткам, перестраивает цитоскелет через Rho ГТФазу, и увеличивает активность разрушающих ферментов внеклеточного матрикса. Повышенная экспрессия RHAMM также клинически коррелировала с метастазами рака. С точки зрения механики, RHAMM способствует подвижности раковых клеток через ряд путей, включая фокальную киназу адгезии (ФАК), МАР-киназу (МАРК), PP60 (с-SRC), и ГТФазы. Рецептор ГК-индуцированной подвижности может также взаимодействовать с CD44, стимулируя ангиогенез в сторону метастатического поражения.

Инъекции гиалуроновой кислоты

Гиалуроновая кислота является распространенным ингредиентом в продуктах по уходу за кожей. До недавнего времени, наполнители гиалуроновой кислоты вводили, используя классическую острую иглу для подкожных инъекций. Игла проходила через нервы и сосуды, вызывая боль и синяки. В 2009 году была разработана новая техника, с помощью которой кожа прокалывается острой иглой, а затем микроскопическая полая игла скользит под кожей, не прокалывая ее глубже.

Добавки в коневодстве

Гиалуроновая кислота используется для лечения суставных заболеваний у лошадей, в особенности во время соревнований или тяжелой работы. ГК предписывается при запястной и скакательной дисфункции, при отсутствии подозрений на сепсис или перелом. Часто используется при синовите, связанном с остеоартритом у лошадей. Вещество может вводиться непосредственно в пораженный сустав, или внутривенно при менее локализованных нарушениях. Может вызывать слабое нагревание связок при прямом введении, но не влияет на клинические результаты. При внутрисуставном введении, лекарство полностью метаболизируется, менее чем за неделю. Обратите внимание, что, в соответствии с канадским регулированием, гиалуроновая кислота, HY-50, не должна вводиться животным, предназначенным на убой. В Европе, однако, не считают, что этот препарат оказывает какой-либо эффект и влияет на вкусовые качества конины.

Этимология

Гиалуроновая кислота извлекается из гилоса (от греч. «стекловидное тело») и уроновой кислоты, так как она была впервые выделена из стекловидного тела и обладает высоким содержанием уроновой кислоты. Термин «гиалуронат» относится к сопряженной основе гиалуроновой кислоты. Поскольку молекула, как правило, присутствует в естественных условиях в полианионном виде, ее обычно называют гиалуроновой кислотой.

История

Гиалуроновая кислота содержится во многих тканях организма, таких как кожа, хрящи и стекловидное тело. Поэтому она хорошо подходит в качестве дополнения биомедицинских добавок, ориентированных на эти ткани. Первый биомедицинский продукт из ГК, Геалон, был разработан в 1970-х и 1980-х гг. компаний Pharmacia, и предназначался для использования в хирургии глаза (а именно, при пересадке роговицы, хирургии катаракты, глаукомы, и операциях по восстановлению отслоенной сетчатки). Другие биомедицинские компании также производят марки ГК для использования в глазной хирургии. Исходный гиалуронан имеет относительно короткий период полураспада (что было показано в опытах на кроликах), поэтому для увеличения длины цепи и стабилизации молекулы для ее использования в медицинских целях были разработаны различные технологии производства. Использовались такие методы, как внедрение перекрестных связей на основе белка, внедрение молекул, поглощающих свободные радикалы, таких как сорбит, и минимальная стабилизация цепей ГК с помощью химических агентов, например, стабилизированная гиалуроновая кислота неживотного происхождения. В конце 1970-х, интраокулярная имплантация линз часто сопровождалась тяжелым отеком роговицы, за счет повреждения эндотелия клеток во время операции. Было очевидно, что необходима вязкая, прозрачная, физиологическая смазка для предотвращения такого соскоба из эндотелиальных клеток.

Исследования

Благодаря своей высокой биосовместимости и присутствию во внеклеточном матриксе тканей, гиалуроновая кислота становится популярной в качестве биоматериала в исследованиях тканевой инженерии. В частности, ряд научно-исследовательских групп обнаружили особые свойства гиалуроновой кислоты в области тканевой инженерии. Эта дополнительная функция позволяет исследователям сформировать требуемую форму, а также воспроизвести терапевтические молекулы. Гиалуроновая кислота может быть создана путем присоединения тиолов (торговое название: Extracel, HyStem), метакрилатов, гексадисиломидов (торговое название: Hymovis), и тираминов (торговое название: Corgel). Гиалуроновая кислота также может быть создана нарямую из формальдегида (торговое название: Hylan-A) или из дивинилсульфона (торговое название: Hylan-B). Благодаря своей способности регулировать ангиогенез путем стимулирования пролиферации эндотелиальных клеток, гиалуроновая кислота может быть использована для создания гидрогелей для изучения морфогенеза сосудов. Эти гидрогели имеют свойства, подобные человеческим мягким тканям, но также легко контролируются и изменяются, что делает ГК очень подходящим веществом для исследований в области тканевой инженерии. Например, гидрогели ГК применяются для воспроизводства сосудистой сети из эндотелиальных клеток-предшественников с использованием соответствующих факторов роста, таких как VEGF и Ang-1, чтобы способствовать пролиферации и образованию сосудистой сети. В этих гелях имеется вакуоль (небольшая полость) и образование просвета, сопровождаемые разветвлением и прорастанием через деградацию гидрогеля и, в конечном счете, образующие конструкцию сложной сети. Способность генерировать сосудистые сети, используя гидрогели ГК, приводит к возможности клинического применения ГК. В исследовании в естественных условиях, когда гидрогель ГК с эндотелиальными колониеобразующими клетками были имплантированы мышам через три дня после формирования гидрогеля, воспроизведенная сосудистая сеть прижилась в течение 2 недель после имплантации. Это указывает на жизнеспособность и функциональность сосудистой сети.

Гиалуроновая кислота купить

Гиалуроновая кислота является достаточно важным компонентом, который входит в состав соединительной ткани, а также содержится в биологических жидкостях (в частности - синовиальной) и производится гиалуронат-синтетазами (класс мембранных белков). Гиалуроновая кислота является трансдермальной системой доставки многих других активных компонентов, необходимых для здоровья кожи лица. На рынке существует масса препаратов, содержащих в качестве компонента гиалуроновую кислоту, и применяемых в косметологии и медицине.

Изобретение относится к птицеперерабатывающей и фармацевтической промышленности, а именно к биохимическому способу получения гиалуроновой кислоты, применяемой в медицине в качестве ранозаживляющего средства и пролонгатора действия различных лекарственных средств, в парфюмерии и косметике. В способе получения гиалуроновой кислоты, включающем измельчение петушиных гребней, экстракцию, объединение экстрактов, отделение водной фазы, осаждение целевого продукта, перед измельчением сырье предварительно обескровливают этиловым спиртом в соотношении 1: 2, затем измельченное сырье дополнительно подвергают обработке ультразвуком с частотой вибрации 16 - 20 кГц в течение 5 - 10 мин, а экстракцию проводят водой с температурой 45 - 50 o С в течение 20 - 25 мин, при этом отделение водной фазы осуществляют вакуумным фильтрованием, осаждение - 95%-ным этиловым спиртом в соотношении 1: 3 с последующим фильтрованием и сушкой препарата. Способ позволяет упростить технологический процесс получения гиалуроновой кислоты. 4 ил., 2 табл.

Изобретение относится к птицеперерабатывающей и фармацевтической промышленности, а именно к рациональному использованию сырьевых ресурсов и развитию нетрадиционных технологий на основе биохимического способа получения гиалуроновой кислоты (ГУК), применяемой в медицине в качестве ранозаживляющего средства и пролонгатора действия различных лекарственных средств, в парфюмерии и косметике. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения гиалуроновой кислоты, предусматривающий многократную экстракцию измельченных куриных гребней водным раствором н-пропилового, изо-пропилового или трет-бутилового спирта, объединение экстрактов, добавление к ним хлорида натрия, расслоение системы, отделение водной фазы и осаждение из него целевого продукта. Степень извлечения гиалуроновой кислоты 50%, содержание белка - менее 1)% . Недостатками способа является длительность процесса экстракции, значительный расход органического растворителя, токсичность производства, ограниченность применения. Технической задачей изобретения является упрощение технологического процесса, сокращение продолжительности экстракции, снижение уровня токсичности, ограниченное использование органического растворителя, полная его регенерация, повышающая экономическую эффективность производства, возможность размещать данное производство на птицеперерабатывающих предприятиях, решая проблему рационального использования сырья. Поставленная задача достигается тем, что в способе получения гиалуроновой кислоты, включающем измельчение петушиных гребней, экстракцию, объединение экстрактов, отделение водной фазы, осаждение целевого продукта, новым является то, что перед измельчением сырье предварительно обескровливают этиловым спиртом в соотношении 1:2, затем измельченное сырье дополнительно подвергают обработке ультразвуком с частотой вибрации 16-20 кГц в течение 5-10 мин, а экстракцию проводят водой с температурой 45- 50 o C в течение 20-25 мин, при этом отделение водной фазы осуществляют вакуумным фильтрованием, осаждение - 95%-ным этиловым спиртом в соотношении 1:3 с последующим фильтрованием и сушкой препарата. Технический результат выражается не только в достижении поставленной задачи, но и в увеличении степени извлечения гиалуроновой кислоты, повышения качества целевого продукта, повышения экологичности производства, разработке и внедрении комплексной технологии, позволяющей использовать остаток животной ткани от выделения кислоты в производстве кормовой муки. Гиалуроновая кислота - типичный мукополисахарид. Важным структурным признаком его является наличие чередующихся остатков аминосахаров и остатков уроновых кислот. В тканях и жидкостях ГУК существует в свободном состоянии или ассоциирована с белками, образуя вязкие растворы. Биополимер входит до 5% к массе в состав основного вещества многих видов соединительной ткани (петушиные гребни, стекловидное тело глаза, синовиальная жидкость, кожа). В тканях петушиного гребня ГУК распределена в мукоидных волокнах подкожного слоя, наиболее широкого у основания . Гиалуроновая кислота - белое, твердое аморфное вещество, растворимое в воде и нерастворимое в органических растворителях. Характерным ее свойством является высокая вязкость. Молекулярная масса составляет от 510 4 - 810 6 , что зависит от происхождения препарата, способа и метода определения . По своей конформации молекулы ГУК представляют собой беспорядочно свернутые клубочки. Применение кислотного гидролиза, метилирования, использование нескольких видов ферментативного гидролиза гиалуронидазами различного происхождения и ряда других методов позволило предложить для гиалуроновой кислоты формулу, в которой чередуются остатки глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина. Эти дисахаридные фрагменты связаны в молекулы гиалуроновой кислоты - 1,4-связями (фиг.1) . Биологическое значение гиалуроновой кислоты состоит прежде всего в том, что она является цементирующим, как бы склеивающим веществом соединительнотканных систем организма. Она является основой функционирования муколитической системы, определяющей, в частности, проницаемость тканей и сосудов. Вследствие высокого значения молекулярной массы кислота выполняет роль структурообразователя, "связывателя" воды в промежуточных полостях, гелеобразных матрицах, что определяет тургор тканей и повышает их сопротивление действию сжимающих нагрузок. Способствует стойкости организма к проникновению инфекции. Антифрикционные и демпферные свойства тканевых жидкостей, в частности синовиальной, определяются наличием в них биополимера. Биологические свойства кислоты определили широкое ее использование при изготовлении лекарственных, фармацевтических препаратов и косметических изделий. Например, обоснована целесообразность использования ГУК как заменителя стекловидного тела. Использование ее растворов в качестве операционной среды, предохраняющей внутренние ткани глаза от механических воздействий, резко повышает эффективность операций на глазе человека. На основе гиалуроновой кислоты создаются вязкоэластичные материалы. Кроме офтальмологии, кислота используется в ревматологии (для замещения синовиальной жидкости), при лечении артрозов, в артопластике и остеомии для защиты хрящевых поверхностей и периферийного нерва, в дерматологии - для защиты кожных ран при экземах и трофических расстройствах кожи; в производстве косметических препаратов (гели, кремы, лосьоны). При определении общего химического состава коллагенсодержащего сырья пользовались методами: массовой доли влаги -; жира - методом Сокслета ; белка - . Фракционный состав белков определяли последовательным экстрагированием водо-, соле- и щелочерастворимых белковых фракций соответственно дистиллированной водой, раствором хлористого калия с массовой долей 5% и раствором гидроксида натрия с массовой долей 10% с последующим количественным определением белка с биуретовым реактивом . Традиционно в качестве объектов для получения гиалуроновой кислоты используют в основном пупочные канатики, синовиальную жидкость, стекловидное тело глаза, т.к. это сырье является наиболее доступным для специалистов, работающих в области медицины и фармакологии. Петушиные гребни также рекомендуется использовать в качестве источника ГУК . Проведенный нами сравнительный анализ химического состава гребня по отношению к другим коллагенсодержащим продуктам убоя птицы (фиг.2) показал преобладание в нем массовой доли белка (19,8% к массе сырья) при массовом превалировании протеиноидной фракции (14,4% к массе сырья). Проведение специфической гисто-морфологической окраски ткани по методу Ван-Гизона позволило выявить плотно упакованную систему коллагеновых волокон и пучков, определяющих упроченную структуру гребня. Высокая доля коллагеновых волокон в структуре ткани с низкой массовой долей жиров подтверждает целесообразность получения интересующего биополимера. В то же время следует подчеркнуть, что головы птицы с гребнем находят очень ограниченное применение в пищевых целях, а отдельно гребень не используется как исходное сырье совсем. Его выход составляет 3,8% к массе тушки. Таким образом, птицеперерабатывающая промышленность имеет реальные и достаточные резервы в получении биополимера за счет увеличения доли полезного использования вторичных малоценных продуктов переработки. Необходимым условием при производстве гиалуроновой кислоты является, прежде всего, возможность выделения ее в нативном высокополимеризованном состоянии, в виде высокоочищенных препаратов, свободных от белка. Способ получения гиалуроновой кислоты осуществляется следующим образом. Свежие петушиные гребни подвергались предварительной обработке в виде промывки проточной водопроводной водой и обескровливания этиловым спиртом в соотношении 1: 2. Отмытые от крови во избежание окислительной деструкции ткани могут быть "законсервированы" на длительное (до 24 мес.) время при температуре 4-22 o C в 95 %-ном этаноле . Для дальнейшей обработки гребни измельчали на гомогенизаторе (дезинтеграторе, шаровой мельнице) . С целью отделения белка и высвобождения кислоты из ее комплексов с белками и другими мукополисахаридами, подготовленные гребни подвергали ультразвуковой обработке с частотой вибрации 16-20 кГц в течение 5-10 мин и затем водной экстракции при температуре 45-50 o C в течение 20-25 мин. Водный раствор ГУК отделяли от остатка ткани путем вакуумного фильтрования. Из отфильтрованных растворов ГУК осаждали 95%-ным этиловым спиртом в соотношении 1: 3 и фильтровали. Осадок упаривали над пятиокисью фосфора в вакууме . Далее, в зависимости от назначения ГУК хранят в высушенном виде при температуре не выше -18 o C или растворяют в физиологическом буферном растворе и упаковывают в удобную тару, например в шприцы. Полученный таким способом биопрепарат представляет собой сплетение тончайших нитей большой жесткости. Он легко растворим в воде, давая совершенно прозрачные неопалесцирующие растворы. Промывку проточной водой сырья осуществляли с целью удаления механических примесей с поверхности гребней. Обескровливание проводили этиловым спиртом в соотношении 1:2, что способствует улучшению цвета и степени очистки готового биополимера. Использование более 2 объемов приводит к неоправданным расходам спирта, что экономически нецелесообразно, а менее - не давало желаемого эффекта. Любая процедура выделения ГУК включает последовательное разрушение структур на каждом уровне локализации с целенаправленным использованием при этом определенных факторов. Разрушение структур тканевого уровня достигается измельчением, гомогенизацией для обеспечения, прежде всего, максимального контакта с экстрагентами. Усиливает этот контакт предварительная обработка измельченных тканей гребня птицы ультразвуком, которую проводили с целью не только максимального извлечения биополимера, но и очистки его от белка и других примесей. Отмечено, что рациональной продолжительностью обработки является 5-10 мин. При меньшей продолжительности обработки недостаточен эффект отделения от белка (незначительная степень извлечения). Продолжительность обработки свыше 10 мин приводит к глубокой деструкции коллагеновых волокон и высоким потерям коллагеновой фракции, приводящих также к невозможности полной очистки от белковых примесей, что отражается на снижении качества готового препарата. Изучение влияния частоты вибрации предварительной обработки ультразвуком на эффективность очистки биополимера показывает, что наилучший эффект достигается в интервале 16-20 кГц. Частота менее 16 кГц недостаточна для глубокого и полного разрушения тканей, и, следовательно, снижает выход готового продукта, а выше 20 кГц затрудняет очистку и снижает качество препарата. В процессе водной экстракции значительное влияние на выход гиалуроновой кислоты оказывает температура (фиг.3). Отмечено, что при достижении температуры 50 o C наблюдается максимальный выход биополимера, причем дальнейшее увеличение температуры не приводит к существенным изменениям и создает условия для развития денатурационных и коагуляционных процессов, снижающих чистоту и качество препарата. А температура ниже 50 o C снижает скорость экстракции, и, следовательно, удлиняет весь технологический цикл. Гиалуроновую кислоту извлекают ив водной среды путем осаждения ее 95%-ным этиловым спиртом. Результаты проведенных исследований (фиг.4) показывают, что максимальный выход препарата наблюдается при соотношении водного раствора и спирта 1:3. Дальнейшее добавление объема спирта нецелесообразно, а объемы менее указанных не дают полного осаждения, и, следовательно, выхода продукта. Использование в технологии производства гиалуроновой кислоты спирта подразумевает полную его регенерацию. Согласно оценке химического состава осадок нерастворившихся тканей (массовая доля белка - 14,6%; жира - 5,6%) целесообразно использовать в производстве кормовой муки. Способ получения гиалуроновой кислоты поясняется конкретными примерами. Пример 1. Свежие петушиные гребни подвергают предварительной промывке проточной водопроводной водой и обескровливанию этиловым спиртом в соотношении 1:2. К 100 г измельченных на гомогенизаторе гребней добавляют воду в соотношении 1:3 и помещают в емкость генератора УЗ-колебаний и обрабатывают 5 мин при частоте вибрации 16 кГц. Затем смесь подвергают водной экстракции при температуре 45 o C в течение 20 мин. Экстракт отделяют от гребней вакуумным фильтрованием. Из водной среды гиалуроновую кислоту выделяют путем осаждения 95%-ным этиловым спиртом в соотношении 1:3. Отфильтрованный осадок упаривают над пятиокисью фосфора в вакууме. Гиалуроновую кислоту хранят в высушенном виде при температуре -18 o C. Данные по примерам 1-4 представлены в табл.1. Как видно из данных табл.1, способ получения гиалуроновой кислоты по режимам, приведенным в примерах 2, 16-20, приводит к получению биопрепарата, уступающего прототипу по качественным показателям, поэтому не является целесообразным с технологической точки зрения. Увеличение расхода спирта на обескровливание сырья и на осаждение кислоты (пример 15, 24) не приводит к снижению качественных показателей по сравнению с прототипом, однако нецелесообразно с экономической точки зрения. Способ получения ГУК по примерам 11-14, 16-23 приводит к недостаточной очистке препарата и снижению выхода. Способ получения гиалуроновой кислоты по режимам в примерах 1, 3-10 позволяет получить биополимер высокой степени очистки и выхода. Преимущества предлагаемого технического решения по сравнению с прототипом представлены в табл.2. Степень извлечения гиалуроновой кислоты по предлагаемому техническому решению выше (55%), чем в прототипе. Это обуславливает меньшие затраты в сырьевых источниках. Предлагаемый способ получения гиалуроновой кислоты значительно расширяет область применения технологии из-за нетоксичности производства. Позволяет максимально приблизить его к сырьевому источнику и комплексно перерабатывать сырье. Сокращается продолжительность экстракции. Экономическая эффективность возрастает в результате регенерации использованного спирта. Применение УЗ-обработки повышает выход препарата, что погашает затраты электроэнергии в предлагаемом способе. Полное исключение токсичных растворителей обеспечивает экологичность технологии и позволяет рационально использовать твердый остаток тканей после извлечения ГУК непосредственно на кормовые цели. Источники информации 1. Пат. 2017751 РФ, кл. C 08 B 37/08. Способ получения гиалуроновой кислоты / В.Ю.Ряшенцев, С.Ф.Никольский, Е.С.Вайнерман, В.И.Поляков, А.Н.Гуров, А.Н.Овчинников, Е.Ю.Игнатова /Россия/ - N 4939023/05: Заявлено 22.05.91; Опубл. 15.08.94, Бюл. N 15. 2. Lauert Т.C. // Chemistry and Molekular Biology of the Intercellutar Matrix / Ed. E.A.Balazs. - London, 1970. - P. 730. 3. Степаненко Б. H. Химия и биохимия углеводов /полисахариды/: Учебное пособие для вузов. - M.: Высшая школа, 1977. - 256 с. 4. ГОСТ 9793-74. Мясные продукты. Методы определения влаги. - Взамен ГОСТ 9793-61; Введ. 01.01.75. - M.: Изд-во стандартов, 1978. - 4 с. 5. Журавская Н.К., Алехина Л.Т., Отряшенкова Л.М. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов. - М.: Агропромиздат, 1985. - 296 с. 6. ГОСТ 25011-81. Мясо и мясные продукты. Методы определения белка. - Введ. 01.01.83. - M.: Изд-во стандартов, 1982. - 10 с. 7. Практикум по биохимии животных / Е.С.Савронь, В.Н.Воронянский, Г.И. Киселев, Чечеткин, Н.Л.Докторович. - М.: Высшая школа, 1967. - 239 с. 8. Рябина B. P., Васюков C.E., Панов В.П., Стародубцев С.Г. Получение, свойства и применение гиалуроновой кислоты // Химико-фармацевтический журнал. - 1987. - N 2, с. 142-153. 9. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - Л.: Медицина, 1969. - 423 с. 10. Игнатова Е.Ю., Гуров А.Н. Принципы извлечения и очистки гиалуроновой кислоты (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 1990. - N 3. - С. 42-46.

Формула изобретения

Способ получения гиалуроновой кислоты, включающий измельчение петушиных гребней, экстракцию, объединение экстрактов, отделение водной фазы, осаждение целевого продукта, отличающийся тем, что перед измельчением сырье предварительно обескровливают этиловым спиртом в соотношении 1: 2, затем измельченное сырье дополнительно подвергают обработке ультразвуком с частотой вибрации 16 - 20 кГц в течение 5 - 10 мин, а экстракцию проводят водой при температуре 45 - 50 o C в течение 20 - 25 мин, при этом отделение водной фазы осуществляют вакуумным фильтрованием, осаждение - 95%-ным этиловым спиртом в соотношении 1: 3 с последующим фильтрованием и сушкой.

Гиалуронан представляет собой гликозаминогликан, который образует во внеклеточном матриксе огромные комплексы с протеогликанами. Особенно в большом количестве эти комплексы присутствуют в хрящевой ткани, где гиалуронан посредством линкерного белка связывается с протеогликаном агреканом

Гиалуронан несет сильный отрицательный заряд и поэтому во внеклеточном пространстве связывается с катионами и с молекулами воды. Это приводит к увеличению жесткости внеклеточного матрикса и создает между клетками водяную подушку, которая гасит силы сжатия

Гиалуронан состоит из повторяющихся единиц дисахаридов, связанных в длинные цепи

В отличие от других гликозаминогликанов, гиалуронановые цепи синтезируются на цитозольной поверхности плазматической мембраны и затем выходят из клетки

Клетки связываются с гиалуронанами с участием семейства рецепторов, известных под названием гиаладгерины, которые инициируют сигнальные процессы, контролирующие миграцию клеток и сборку цитоскелета

Гиалуронан (ГК), также известный под названием гиалуроновая кислота или гиалуронат, представляет собой глюкозаминогликан (ГАГ). В отличие от других гликозаминогликанов (ГАГ), связанных с внеклеточном матриксом, гиалуронан не связан ковалентной связью с протеогликанами сердцевинных белков, а образует очень большие комплексы с секретируемыми протеогликанами.

К числу таких наиболее важных комплексов относятся комплексы, присутствующие в хрящевой ткани, где молекулы ГК , секретируемые хондроцитами (хрящеобразующие клетки), связываются примерно со 100 копиями протеоглика-на агрекана. Агрекановые сердцевинные белки через небольшой линкерный белок связываются с одной молекулой ГК через 40-нм интервалы. Такие комплексы в длину могут достигать более 4 мм и обладать мол массой, превышающей 2 х 108 дальтон. Таким образом, с участием ГК во внеклеточном матриксе хрящевой ткани создаются большие гидратированные пространства.

Эти пространства играют особенно важную роль в тканях с низкой плотностью кровеносных сосудов, поскольку они обеспечивают диффузию питательных компонентов и выведение продуктов обмена из внеклеточного пространства.

Гиалуроновая кислота (ГК) обладают очень простой структурой. Подобно всем ГАГ, они являются линейными полимерами одного из дисахаридов, глюкуроновой кислоты, связанной с N-ацетилглюкозамином посредством (3 (1-3) связи. Как показано на рисунке ниже, молекулы ГК содержат в среднем 10 000 (и до 50 000 этих дисахаридов, связанных b(1-4) связью. Поскольку дисахариды несут отрицательный заряд, они связывают катионы и молекулы воды.

Подобно протеогликанам , ГК увеличивают жесткость внеклеточного матрикса и служат в качестве смазки в таких соединительнотканных структурах, как . Гидратированные молекулы ГК также образуют между клетками водяную подушку, которая позволяет тканям гасить силы сжатия.

Молекулы гиалуроновой кислоты (ГК) гораздо крупнее, чем другие ГАГ. Из-за этого клетки должны расходовать на их формирование большие количества энергии. Подсчитано, что для формирования одной среднего размера цепи ГК, необходимо 50 000 эквивалентов АТФ, 20 000 кофакторов НАД и 10 000 групп ацетил-КоА. Поэтому в большинстве клеток синтез ГК находится под жестким контролем.

Синтез гиалуроновой кислоты (ГК) катализируется трансмембранными ферментами, ГК синтазами, локализованными в плазматической мембране. Эти ферменты несколько необычны в том смысле, что они собирают полимер ГК на цитозольной стороне плазматической мембраны, а затем переносят его через мембрану во внеклеточное пространство. Это принципиально отличается от синтеза других ГАГ, которые образуются в аппарате Гольджи и ковалентно связываются с протеогликанами сердцевинных белков по мере их прохождения по секреторному пути.

Важнейшим способом регуляции синтеза гиалуроновой кислоты (ГК) является изменение экспрессии ферментов, ГК синтаз. Экспрессия этих ферментов индуцируется специфичными для клеток факторами роста. Например, фактор роста фибробластов и интерлейкин-1 являются индукторами экспрессии ферментов в фибробластах, в то время как глюкокортикоиды подавляют экспрессию в этих же клетках. Эпидермальный фактор роста стимулирует экспрессию в кератиноцитах, но не в фибробластах. Секреция ГК контролируется независимо от их синтеза, и это обеспечивает, по крайней мере, два способа контроля уровня ГК в тканях.

Наряду с участием в гидратации тканей, гиалуроновая кислота (ГК) связывается со специфическими поверхностными рецепторами, что приводит к стимуляции внутриклеточных сигнальных путей, контролирующих такие процессы, как миграция клеток. Основным рецептором ГК является CD44, относящийся к семейству белков, называемых гиладгеринами, которые связываются с ГК. К остальным представителям этого семейства относятся протеогликаны (например, версикан, агрекан, бревикан) и линкерный белок, который связывает ГК с агреканом в хрящевой ткани. Множественные формы CD44 образуются при альтернативном сплайсинге транскриптов одного гена, хотя функциональные различия между этими изоформами остаются неясными.

CD44 существует в виде гомодимеров, которые экспрессируются во многих типах клеток или в виде гетеродимеров с ErbВ, тирозинкиназой, которая экспрессируется на эпителиальных клетках.

Цитоплазматический участок CD44 обладает несколькими функциями. Он необходим для правильного связывания с ГК и для сортинга рецепторов на клеточной поверхности. Он также участвует в процессах внутриклеточной передачи сигнала. Картирование функциональных областей в цитоплазматическом участке CD44 проводилось при изучении экспрессии мутантных форм CD44 в культуре клеток, и активации сигнальных путей после прикрепления клеток к ГК.

Из этих исследований мы знаем, что гомодимеры CD44 и гетеродимеры CD44/ErbB активируют нерецепторные тирозинкиназы, например Src, а также представителей семейства небольших G-белков, Ras. Эти киназы активируют такие сигнальные белки, как протеинкиназа С, МАР киназа и ядерные факторы транскрипции.

Наряду с этим, как показано на рисунке ниже, сигналы, передающиеся с участием CD44 , могут изменять сборку актинового цитоскелета у поверхности клеток. Это происходит при активации таких белков, связывающих актин, как фодрин и небольшого G-белка, Rac-1. Одним из последствий реорганизации актина является стимуляция миграции клеток под влиянием связывания CD44 с ГК. В опухолях усиление экспрессии CD44 и секреции ГК коррелирует с увеличением ее агрессивности, и является плохим прогностическим признаком.

Обычно считается, что гиалуроновая кислота (ГК ) играет двоякую роль в стимуляции миграции клеток. Во-первых, за счет связывания с внеклеточным матриксом ГК нарушает межклеточные взаимодействия и взаимодействие клеток с матриксом. Мыши, у которых не происходит экспрессии ГК, характеризуются незначительной величиной межклеточного пространства, вследствие чего животные не могут развиваться нормально. Поскольку ГК обладает большим гидратированным объемом, повышенная секреция ГК в опухоли нарушает целостность внеклеточного матрикса, что приводит к образованию больших промежутков, через которые могут мигрировать опухолевые клетки.

Во-вторых, при связывании ГК с рецепторами CD44 могут активироваться внутриклеточные процессы передачи сигналов, непосредственно приводящие к перегруппировкам цитоскелета и к активации миграции клеток. Это подтверждается данными, полученными в экспериментах по добавлению ГК к клеткам в культуре. Клетки, экспрессирующие CD44, начинают мигрировать сразу же после контакта с ГК, и соединения, разрушающие внутриклеточные сигнальные молекулы и связывающиеся с CD44, ингибируют эту миграцию.

Гиалуроновая кислота!О ней много говорят, ее включают в состав рецептур новых средств по уходу за кожей. Все производители косметики утверждают, что используют лучшие типы гиалуроновой кислоты в своих продуктах. Но что такое гиалуроновая кислота, что она делает, как она работает и какой ее тип считается лучшим?

Гиалуроновая кислота (ГК) – самый важный фактор гидратации кожи. Эта молекула образует трехмерную сеть, которая действует как губка и буквально улавливает воду вокруг и внутри своих складок.

Кроме того, ГК используется организмом в качестве смазки в суставах, из нее в основном состоит ушная раковина, она же один из структурных полимеров стекловидного тела глаза. ГК способна стимулировать или ингибировать воспаление, способствует заживлению ран и восстановлению кожного покрова. Она – важная составляющая межклеточного вещества буквально всей соединительной ткани человеческого организма.

В коже ГК находится главным образом в базальной мембране эпидермиса и дерме, поддерживая пространство между клетками, увлажняя и облегчая прохождение питательных веществ.

В организме женщины весом 60 кг содержится около 13 г гиалуроновой кислоты, 4,3 г из этого количества перерабатываются и обновляются каждый день.

Однако прежде чем обсуждать, как работает ГК и что она может сделать для кожи, было бы неплохо сначала представить короткое досье на это вещество для лучшего понимания способа его действия.

Гиалуроновая кислота 101

Гиалуронан, или гиалуроновая кислота, – это натуральный полимер, то есть большая молекула, состоящая из множества повторяющихся маленьких молекул-«субъединиц».

В случае гиалуроновой кислоты этой субъединицей является дисахарид D-глюкуроновая кислота и N-ацетил-D-глюкозамин, связанные вместе.

Длина молекулы ГК может составлять от 2 до 25 тыс. дисахаридов. Молекулярная масса этого природного полимера колеблется от 800 до 2 000 000 Дальтон (Да), при этом средняя молекулярная масса ГК составляет 3 МДа в суставах и около 2 МДа в коже.

Организм непрерывно синтезирует и разрушает ГК (как упоминалось выше, полная замена ГК в организме происходит примерно каждые три дня). По мере постепенной деградации больших молекул ГК образуются фрагменты самой разной молекулярной массы. Набор этих фрагментов – от 800 Да до 2 MДа – присутствует в любой момент времени в нормальных тканях.

По размерам молекулы ГК делятся на разные фракции.

• Очень высокая молекулярная масса: 3–20 MДа.
• Высокая молекулярная масса: ~ 2 MДа.
• Средняя молекулярная масса: ~ 1 MДа.
• Низкая молекулярная масса: ~ 300 кДа.
• Очень низкая молекулярная масса: ~ 60 кДа.
• Олигомеры: от 800 Да до10 кДа.

Внешний вид и биологические эффекты

Очевидно, что молекулы, молекулярная масса которых может различаться в 12 500 раз, выглядят и ведут себя в биологических системах совершенно по-разному, оказывая разные биологические эффекты. Это более подробно показано в многочисленных исследованиях, проведенных в последние годы.

Обычно говорят, что ГК может поглотить воды в 1000 раз больше ее собственного веса. Однако это относится только к высокомолекулярной ГК, а та, что имеет более низкую молекулярную массу, очевидно, способна поглощать гораздо меньше воды.

Поэтому на практике, если взять 1% высокомолекулярной ГК в воде, то можно получить довольно вязкую жидкость или жидкий гель. Низкомолекулярная ГК в той же концентрации будет гораздо менее вязкой жидкостью или совсем водянистым гелем, тогда как олигомер будет таким же жидким, как вода. Излишне говорить, что ГК с молекулярной массой 20 MДа будет в этом случае очень густым гелем.

Вы можете задаться вопросом, зачем столько информации о размерах молекул и внешнем виде геля. Ответ довольно интересен. ГК с молекулярной массой 3–20 MДа, то есть высокомолекулярная ГК, – это тот тип ГК, который обнаруживается при целлюлите. Это аномально большой размер молекул ГА, за счет чего происходит прочное удержание воды в подкожной жировой клетчатке, что в свою очередь способствует проявлению видимых признаков целлюлита.

Поэтому присутствие в тканях ГК со слишком высокой молекулярной массой нежелательно – это признак патологического процесса. С другой стороны, присутствие в тканях слишком большого числа ГК-фрагментов, то есть слишком большого количества олигомеров или даже ГК с молекулярной массой 20 кДа, также нежелательно, поскольку они, как известно, стимулируют воспаление. Однако даже воспаление в некоторых ситуациях имеет право на существование, и иногда это необходимо (например, при заживлении ран).

Все остальные молекулярные массы (50 кДа – 2 МДа) кажутся нейтральными или полезными, причем 2 МДа считается наиболее «нормальной» (если так можно выразиться) и препятствует воспалению.

Таким образом, мы можем утверждать, что единственный действительно «плохой» тип ГК – это ГК с чрезвычайно высокой молекулярной массой, которая также способствует фиброзу.

Диета, образ жизни и гиалуроновая кислота

Предполагается, что диета, богатая овощами (магний) и фруктами (аскорбиновая кислота), помогает повысить естественный синтез ГК в организме. Также некоторые продукты богаты ГК или ее предшественниками. В качестве примера можно привести костный бульон, мясные субпродукты и суставной хрящ.

Гиалуронан можно также принимать внутрь в виде пищевой добавки, и он действительно «достигает» кожи и суставов, помогая увеличить их гидратацию, дольше сохранить молодость и поддержать здоровье. Это похоже на пероральный прием гидролизованного коллагена, что также помогает отсрочить старение кожи, сохранить упругость и эластичность связок и сухожилий.

Ультрафиолетовое излучение уменьшает содержание ГК в коже, что приводит к ее сухости и воспалению. Обеспечив кожу достаточным количеством ГА летом, в том числе «изнутри», мы можем быть уверены, что она сможет оставаться увлажненной и защищенной от солнечных лучей.

Нет никакой специфической пищи, которая обладала бы доказанной способностью увеличивать собственный синтез ГК в организме, но ежедневное употребление определенного количества питьевой воды будет способствовать гидратации, поскольку молекула воды не менее важна для этого, чем гиалуроновая кислота, ведь без воды гиалуронан абсолютно бесполезен. В идеале необходимо выпивать два литра воды в день. Таким образом, для улучшения увлажнения кожи и получения омолаживающего эффекта целесообразно комбинировать оральное применение ГК в виде БАД и употребление достаточного количества воды. Для максимального результата можно дополнительно использовать качественную сыворотку, гель или крем, содержащие ГК.

Кожная абсорбция ГК из косметических рецептур

Поскольку ГК стимулирует репарацию и увлажнение кожи, а кожа производит ее все меньше и меньше по мере старения, само собой разумеется, хочется добавить немного ГК в кожу в виде косметической сыворотки, крема или геля.

Понятно, что ГК с большой молекулярной массой не сможет даже проникнуть в эпидермис, в то время как все, что ниже 300 кДа, проникает в дерму и даже подкожно-жировую клетчатку. Чем ниже молекулярная масса, тем глубже ГК может проникать в кожу.

Однако не все так просто. Как мы уже упоминали выше, нужно понимать, для чего мы используем в своей рецептуре ГК с более низким молекулярным весом. «Проталкивая» ГК с молекулярным весом 20 кДа в кожу, мы вовсе не решаем всех проблем кожи, поскольку для нее это может оказаться как полезным, так и раздражающим воздействием. В случае использования ГК с чрезвычайно низкой молекулярной массой все осложняется еще больше.

Однако в большинстве исследовательских работ показано, что молекулы ГК с молекулярной массой где-то между 50 и 300 кДа хорошо проникают в кожу и оказывают на нее благотворное влияние. Мой личный опыт тоже говорит о том, что это лучший для использования диапазон молекулярных масс.

ГК с молекулярной массой 1 MДа может гидратировать сам эпидермис, не проникая дальше, в то время как молекула с молекулярной массой 2MДа просто сидит на поверхности эпидермиса и больше никуда не идет. С другой стороны, я обнаружил, что ГК с молекулярной массой 10 кДа не так полезна и в высоких концентрациях может раздражать кожу, что подтверждается данными, приведенными в научной литературе.

Столь разная абсорбционная способность ГК, зависящая от ее молекулярной массы, является причиной того, что все больше косметических компаний в настоящее время в рецептурах используют ГК разного молекулярного веса.

Молекулы ГК также могут быть линейными или сшитыми. Линейная молекула – это стандартная ГК, встречающаяся в организме человека и в природе. Сшитая ГК представляет собой изобретение человека, это более стабильная форма ГК с более высокой гидратирующей способностью. Но, к сожалению, сшитая ГК обладает меньшей способностью проникать в кожу, поскольку молекула «более толстая» и не может легко пересечь эпидермис.

Сшитая ГК используется в качестве филлера в мезотерапии, но сегодня ее также можно встретить в составе некоторых антивозрастных кремов.

Сыворотки, гели и кремы

Достаточно легко получить косметическую сыворотку или гель, используя ГК и воду. Однако кремы – это другое дело. Здесь ГК может сильно увеличить нестабильность эмульсионной системы. Поэтому большинство продуктов с ГК на рынке – это гели и сыворотки, которые легче получить.

Многие представленные на рынке косметические средства с ГК содержат около 0,1% этого вещества, то есть 1 часть ГК и 999 частей воды и некоторых других ингредиентов. Однако более концентрированные продукты могут содержать до 2% ГК. Более высокие концентрации нецелесообразны, поскольку крем или гель становятся слишком густыми и неудобными.

Гиалуроновая кислота в настоящее время – один из самых популярных и важных ингредиентов для борьбы со старением кожи и в уходе за лицом. Ее также можно встретить в некоторых средствах для ухода за телом. К сожалению, если тип и концентрация ГК специально не упоминаются на упаковке косметического средства, очень сложно понять, что именно и в каких концентрациях в нем используется, но это относится ко всем ингредиентам косметических рецептур.

С другой стороны, некоторые продукты для ухода за кожей включают в себя активные вещества, которые повышают собственный синтез ГК в коже. Это дает несколько отсроченный результат, но обходит проблему абсорбции ГК, поскольку «собственная» ГК синтезируется внутри кожи. Другие активные вещества, используемые в косметике, могут ингибировать в человеческом организме действие разрушающих ГК ферментов – гиалуронидаз (большинство полифенолов обладает такой активностью). Это продлевает срок полезного использования ГК в коже и подавляет ее раннюю или чрезмерную деградацию.

Каково происхождение ГК для косметики?

Когда-то давно в косметике использовали ГК животного происхождения, получаемую из свиных ушей или петушиных гребней. Я помню, что первая ГК, которую мы купили для использования в наших продуктах в 2002 году, была получена из поросят.

Сегодня ГК производится путем бактериальной ферментации, что позволяет получить стандартный размер молекул – 2 MДa. Затем ее «разрезают» либо ферментами, либо гидролизом и получают молекулы меньшего размера. В организме человека происходит то же самое – ГК с молекулярной массой 2 MДа разрезается на более «мелкие кусочки» ферментами, называемыми гиалуронидазами.

Гиалуронидаза и целлюлит

Иногда, чтобы разрушить ГК с чрезмерно высокой молекулярной массой, о которой мы упоминали выше, врачи вводят в ткани гиалуронидазу.

Одно из таких применений гиалуронидазы – временное сокращение признаков целлюлита. Я использую слово «временное», потому что человеческий организм может восстановить молекулярную массу только что синтезированной ГК до 20 MДа всего за несколько дней.

Таким образом, долгосрочное решение проблемы целлюлита не может быть достигнуто инъекциями гиалуронидазы. Это должны быть меры, в первую очередь направленные на снижение удержания воды в тканях и уменьшение синтеза ГК с молекулярной массой 20 MДa. Но это история для другой статьи…

Заключение

По мере старения в организме человека синтезируется все меньше и меньше ГК, в связи с чем необходимо защитить уже имеющуюся ГК и увеличить ее содержание в коже.

Это можно сделать, избегая чрезмерного воздействия солнца; с помощью диеты, богатой овощами, травами, субпродуктами; выпивая достаточное количество воды; используя хорошие косметические средства для ухода за кожей на основе ГК с молекулами разных молекулярных масс, в идеале – от 50 до 300 кДа.

Биологически активные добавки с гиалуроновой кислотой также помогают, поскольку действительно оказывают благотворное влияние на кожу (и суставы), помогая увлажнять и питать организм «изнутри».